精準(zhǔn)定量1kb DNA Ladder
● 產(chǎn)品編號(hào)及規(guī)格：
RTM417-02 100T(2×250μl)
● 產(chǎn)品簡介：
本產(chǎn)品是由8條帶狀雙鏈DNA條帶組成，適用于瓊脂糖凝膠電泳中DNA條帶的分析。
本產(chǎn)品為即用型產(chǎn)品，已含有1×loading
buffer，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，直接取2-5μl電泳，使用方便，電泳圖像清晰。本產(chǎn)品中8條帶分為1000（50
ng/5 μl），2000（50
ng/5 μl），3000（50
ng/5 μl），4000（100 ng/5 μl），5000（50 ng/5 μl），6000（50
ng/5 μl），8000（50
ng/5 μl），10000bp（50
ng/5 μl）。其中4000bp條帶加亮顯示。
● 儲(chǔ)存及運(yùn)輸：
4℃貯存3個(gè)月，
-20℃長期貯存；常溫運(yùn)輸。
● 使用方法：
1. 取2-5μl本產(chǎn)品加入到瓊脂糖凝膠的加樣孔中（每1mm×1mm加樣孔加1μl，如果加樣孔寬于5mm，可以適當(dāng)增加上樣量）就行電泳。
2. 建議電泳條件:凝膠濃度為0.8-1.0％，凝膠長度10
cm，電泳電壓~7v/cm，電泳時(shí)間60+分鐘。
3. 通過核酸染料染色后紫外燈或藍(lán)光儀下觀察條帶。
● 注意事項(xiàng)：
1. 瓊脂糖的質(zhì)量對DNA的電泳有很大影響，電泳時(shí)請盡量使用質(zhì)量優(yōu)等的瓊脂糖。由于PAGE電泳的特殊性，該產(chǎn)品不建議用于PAGE電泳。
2. 使用與電泳緩沖液一致的緩沖液融化瓊脂糖，例如使用1×TAE緩沖液電泳，需使用1×TAE緩沖液溶膠。
3. 多次電泳后緩沖液電導(dǎo)增強(qiáng)，相同電壓下電流增大，導(dǎo)致分辨率降低，并且明顯產(chǎn)熱，嚴(yán)重時(shí)會(huì)引起凝膠熔化或DNA變性。
4. 推薦使用RealSafe系列染料（貨號(hào)：GR002，GR003，GR004）染色。如果使用Goldview或EB等染料進(jìn)行染色，由于此類染料帶更多的正電荷（染料移動(dòng)方向與核酸泳動(dòng)方向相反），隨著電泳時(shí)間延長，染料向大片段聚集，凝膠會(huì)出現(xiàn)陰陽膠現(xiàn)象（染料含量高的凝膠紫外下較亮，含量低的凝膠紫外下發(fā)暗），導(dǎo)致小分子量DNA顯色很弱或不可見。陰陽膠可以在電泳結(jié)束后浸泡染色，將膠浸沒在含1 μg /ml EB或Goldview的電泳緩沖液中20-25 min，小分子量DNA會(huì)顯色清楚。更長時(shí)間浸泡會(huì)因DNA分子擴(kuò)散而使條帶彌散，小分子量DNA更易彌散。
5. 紫外照射下EB易分解，使DNA條帶熒光變淺。DNA受紫外光照射形成嘧啶二聚體，不利于待回收片段的下游工作，因此盡可能減少紫外照射時(shí)間。
6.
蔗糖會(huì)結(jié)合DNA，降低其電泳遷移率，建議DNA樣品上樣使用含甘油的Loading Buffer。
7.
大部分核酸工具酶會(huì)結(jié)合DNA，降低其電泳遷移率，大分子量DNA尤為明顯。
● 實(shí)驗(yàn)示例：
● 附錄：
DNA在瓊脂糖凝膠中的有效分離范圍
|
瓊脂糖濃度%（w/v）
|
雙鏈DNA有效分離范圍（bp）
|
優(yōu)選電泳緩沖液
|
示蹤染料相當(dāng)于雙鏈DNA片段粗略大小(bp)
|
|
溴酚藍(lán)
|
二甲苯菁
|
|
TBE
|
TAE
|
TBE
|
TAE
|
|
0.5
|
2000-50000
|
1×TAE
|
750
|
1150
|
13000
|
16700
|
|
0.8
|
800-10000
|
1×TAE
|
320
|
530
|
4830
|
6500
|
|
1.0
|
400-8000
|
1×TAE
|
220
|
370
|
3030
|
4160
|
|
1.2
|
300-7000
|
1×TAE/0.5×TBE
|
160
|
275
|
2070
|
2890
|
|
1.5
|
200-3000
|
1×TAE/0.5×TBE
|
110
|
190
|
1300
|
1840
|
|
2.0
|
100-2000
|
0.5×TBE
|
65
|
120
|
710
|
1040
|
|
3.0
|
25-1000
|
0.5×TBE
|
30
|
60
|
300
|
460
|
使用RTM417 1kb DNA ladder產(chǎn)品發(fā)表部分文章列表：
1. [2023 IF=4.9] Degradation of Natural Undaria pinnatifida into Unsaturated Guluronic Acid Oligosaccharides by a Single Alginate Lyase.
Marker :RTM417，1kb DNA ladder
Author: Hui Wang, Jiaqi Wen, Nuraliya Ablimit, Kun Deng, Wenzhuo Wang and Wei Jiang
Journal: Marine Drugs 2024, 22,453.
Institution：College of Biological Sciences, China Agricultural University
Paper link：https://doi.org/10.3390/md22100453
