Tricine多肽電泳參考文獻(xiàn)
何時(shí)使用Tricine-SDS-PAGE檢測(cè)小分子肽？
如果你感興趣的蛋白小于20KD，你就要使用Tricine-SDS-PAG系統(tǒng)來(lái)分離小肽了。Tricine-SDS-PAGE系統(tǒng)是可以分離1-100KD的蛋白質(zhì)。此系統(tǒng)最適合分離低于30KD的蛋白質(zhì)。
相關(guān)產(chǎn)品：超低分子量蛋白電泳試劑盒（貨號(hào)：RTD6120）
Tricine-SDS-PAGE與傳統(tǒng)SDS-PAGE的區(qū)別：
1 分離膠中更高的Tris濃度：終濃度為0.75M；普通SDS-PAGE為0.375M
2 分離膠和濃縮膠中的pH都是8.45
3 分離膠中更高的交聯(lián)度（C）-5%，普通的SDS-PAGE為C一般為3.3%。
小肽的電泳：
1 關(guān)于陰極緩沖液和陽(yáng)極緩沖液：
Tricine-SDS-PAGE系統(tǒng)不同于常規(guī)的SDS-PAGE，使用兩種緩沖液電泳。電泳槽內(nèi)槽是1×陰極緩沖液，含有Tricine和SDS。外槽是1×陽(yáng)極緩沖液，是0.2M Tris。由于電泳槽內(nèi)外槽緩沖液不一樣，電泳前要檢測(cè)電泳槽是否漏液，如果漏液的話將導(dǎo)致內(nèi)外槽緩沖液混合，導(dǎo)致電泳結(jié)果不好。如果發(fā)現(xiàn)內(nèi)槽緩沖液漏液，可以將外槽緩沖液加滿到和內(nèi)槽緩沖液齊平。
2 關(guān)于電泳時(shí)的電壓：
濃縮膠一般用穩(wěn)壓80-100V，如果使用新鮮的緩沖液，這時(shí)的電流應(yīng)該在20mA左右，如果電流太小，請(qǐng)檢查緩沖液以及電泳設(shè)備是否有問(wèn)題。當(dāng)指示前沿至濃縮膠和分離膠交界時(shí)，電壓可以調(diào)高到120-150V。整個(gè)電泳時(shí)間約需2-3小時(shí)。
3 關(guān)于電泳的指示前沿：
由于溴酚藍(lán)在Tricine-SDS-PAGE系統(tǒng)中泳動(dòng)很快，很快就跑到緩沖液中去了。超低分子量蛋白Marker和2×Tricine 上樣緩沖液中的指示前沿是考馬斯亮藍(lán)G-250。電泳中只要指示前沿跑不丟，小肽就不會(huì)跑丟。然而，考馬斯亮藍(lán)G-250作為指示前沿的缺點(diǎn)是在分離膠中比較彌散。如果電泳時(shí)間較短，染色時(shí)會(huì)遮擋3KD左右的小肽。
4 小肽的染色：
由于小肽還有較少的氨基酸，染色時(shí)結(jié)合的染料就少，導(dǎo)致染色靈敏度比較低。上樣時(shí)要加大上樣量。另外，低于5KD的小提容易從PAGE膠上脫離，染色前最好有個(gè)固定步驟(0.5％戊二醛，30%乙醇)。為了更好的染色小肽，可以選擇FastBlue蛋白染色液（Cat No：RTD6202），該產(chǎn)品除具有染色快，無(wú)毒，靈敏性高等特點(diǎn)外，還能對(duì)小肽在染色中起到固定作用，不至于小肽在染色和脫色中從凝膠中脫離，是常規(guī)染色液的理想替代品。
小肽的轉(zhuǎn)膜/Western Blot實(shí)驗(yàn)
由于小肽比較小，轉(zhuǎn)膜時(shí)要注意小肽非常容易透過(guò)PVDF膜。兩種方法可以解決這一問(wèn)題：兩張PVDF膜重疊在一起；縮短轉(zhuǎn)膜時(shí)間（半干法轉(zhuǎn)移，200mA 15-20分鐘就可以了）。轉(zhuǎn)膜使用0.22 μm的PVDF膜。濕轉(zhuǎn)（轉(zhuǎn)膜緩沖液加20%甲醇，不加或少加SDS，200mA 30-35分鐘）。
小肽電泳文獻(xiàn)：
1 Schagger, H. & von Jagow, G. Tricine–sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1–100 kDalton. Anal. Biochem. 166, 368–379 (1987). PDF下載
最原始小肽電泳的文獻(xiàn)。
2 Schagger, H. Tricine–SDS-PAGE. Nature Protocols. 1,16-23，2006 PDF下載
87年的作者Schagger在Nature Protocols 開(kāi)刊文章，寫的精細(xì)，值得推薦。
3 兩篇國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)，主要討論尿素的作用。
多肽的電泳分離 2004
有效分離1kDa小肽的Tricine-SDS-PAGE方法 2004